Frequency of common polymorphisms in Caveolin 1 (CAV1) gene in adults with high serum triglycerides from Colombian Caribbean Coast / Frecuencia de polimorfismos comunes en el gen de Caveolina 1 (CAV1) en adultos con hipertrigliceridemia en el Caribe Colombiano

Abstract Background: Caveolin 1 gene (CAV1) has been associated with insulin resistance, metabolic syndrome and hypertension in humans. Also, it has been related to high serum triglycerides in rodents, however there is little evidence of this relation in humans. Aim: To describe frequencies of common variations in CAV1 in adults with high serum triglycerides. Methods: A case-control study was carried out with adults from Colombian Caribbean Coast. A whole blood sample was employed to measure serum concentrations of triglycerides, glucose, total cholesterol and HDLc. Six common Single Nucleotide Polymorphism (SNP) in CAV1 were genotyped (rs926198, rs3779512, rs10270569, rs11773845, rs7804372 and rs1049337). Allelic and genotypic frequencies were determined by direct count and Hardy-Weinberg Equilibrium (HWE) was assessed. Case and control groups were compared with null-hypothesis tests. Results: A total of 220 cases and 220 controls were included. For rs3779512 an excess in homozygotes frequency was found within case group (40.4% (GG), 41.3% (GT) and 18.1% (TT); Fis=0.13, p=0.03). Another homozygotes excess among case group was found in rs7804372 (59.5% (TT), 32.3% (TA) and 8.2% (AA); Fis= 0.12, p= 0.04). In rs1049337, cases also showed an excess in homozygotes frequency (52.7% (CC), 35.0% (CT) and 12.3% (TT); Fis= 0.16, p= 0.01). Finally, for rs1049337 there were differences in genotype distribution between case and control groups (p <0.05). Conclusion: An increased frequency of homozygote genotypes was found in subjects with high serum triglycerides. These findings suggest that minor alleles for SNPs rs3779512, rs7804372 and rs1049337 might be associated to higher risk of hypertriglyceridemia.

Resumen Introducción: En humanos, el gen Caveolina 1 (CAV1) ha sido asociado con resistencia a la insulina, síndrome metabólico e hipertensión. Además, ha sido relacionado con hipertrigliceridemia en roedores, sin embargo existe poca evidencia de esta relación en humanos. Objetivo: Describir la frecuencia de variaciones comunes del gen CAV1 en adultos con hipertrigliceridemia. Métodos: Se realizó un estudio de casos y controles con adultos del Caribe Colombiano. Fue usada una muestra de sangre venosa periférica para medir las concentraciones séricas de triglicéridos, glucosa, colesterol total y colesterol HDL. Fueron genotipificados seis Polimorfismos de Nucleótido Simple (SNP) en CAV1 (rs926198, rs3779512, rs10270569, rs11773845, rs7804372 y rs1049337). Las frecuencias alélicas y genotípicas se determinaron por conteo directo y se evaluó el equilibrio de Hardy-Weinberg. Los grupos de casos y controles se compararon con pruebas de hipótesis nula. Resultados: Se incluyeron un total de 220 casos y 220 controles. Para rs3779512 se encontró un exceso de homocigotos en el grupo de casos (40.4% (GG), 41.3% (GT) y 18.1% (TT); Fis= 0.13, p= 0.03). Fue encontrado otro exceso de homocigotos en el grupo de casos al analizar el rs7804372 (59.5% (TT), 32.3% (TA) y 8.2% (AA); Fis= 0.12, p= 0.04). En rs1049337, los casos también tuvieron un exceso en la frecuencia de homocigotos (52.7% (CC), 35.0% (CT) y 12.3% (TT); Fis= 0.16, p= 0.01). Finalmente, hubo diferencias en la distribución genotípica del rs1049337 entre los grupos de casos y controles (p <0.05). Conclusiones: Se encontró una elevada frecuencia de homocigotos en los sujetos con hipertrigliceridemia. Estos hallazgos sugieren que los alelos menores de los SNPs rs3779512, rs7804372 y rs1049337 podrían estar asociados con trigliceridemia elevada.

Construcción de un modelo animal de fibrosis pulmonar inducido por Bleomicina / Making an animal model of Bleomycin-induced pulmonary fibrosis

La fibrosis pulmonar es una enfermedad crónica, progresiva y letal, cuya etiología se desconoce. El modelo de fibrosis pulmonar inducida por Bleomicina en ratas es útil para ilustrar la patobiología in vivo de la enfermedad, así como para identificar nuevos blancos farmacológicos y estimar la eficiencia de nuevas moléculas o procedimientos Objetivo: El objetivo de este trabajo fue construir un modelo animal de fibrosis pulmonar secundaria a Bleomicina, en ratas Wistar, como herramienta que pueda servir de base para futuros diseños experimentales. Materiales y métodos: Se trabajó con dos grupos de ratas Wistar para la administración del medicamento por vía intratraqueal. El grupo experimental recibió una dosis única (2.0 U/Kg) de Bleomicina, mientras que el grupo control recibió un volumen equivalente de solución salina. A los 14 o 28 días se realizó un lavado broncoalveolar con recuento total y diferencial celular y análisis histopatológico pulmonar. Resultados: La histología de una parte del grupo experimental tratado con Bleomicina y sacrificado a los 14 días reveló daño pulmonar caracterizado por inflamación aguda, hemorragia intraalveolar y proliferación fibroblástica intersticial incipiente; en el resto del grupo experimental la histología a 28 días reveló además alteración de la arquitectura pulmonar debida a fibrosis y aumento en el número de macrófagos intraalveolares e inflamación linfocitaria. Conclusiones: Se implementó satisfactoriamente un modelo de fibrosis pulmonar inducido farmacológicamente por Bleomicina en ratas Wistar.

Pulmonary fibrosis is a chronic, progressive and fatal disease, whose etiology is unknown. The model of Bleomycininduced pulmonary fibrosis in rats is useful to illustrate the pathobiology of the disease in vivo as well as to identify new drug targets and to estimate the efficacy of new promising molecules or procedures. Objective: The aim of this work was to make an animal model of pulmonary fibrosis secondary to bleomycin, in Wistar rats, as a tool that can serve as a basis for future experimental designs. Materials and methods: We worked with two groups of Wistar rats which were anesthetized and intubated for intratracheally drug administration. The experimental group received a single dose (2.0 U / kg) of Bleomycin, while the control group received an equivalent volume of saline. At 14 or 28 days after treatment, a bronchoalveolar lavage with total and differential cellular count were performed. Additionally, the lungs were dissected for histopathogical analysis. Results: In the experimental group treated with Bleomycin and sacrificed at 14 days, histology revealed lung damage characterized by acute inflammation, intra-alveolar hemorrhage and fibroblast proliferation; in sacrificed animals at 28 days, alteration of lung architecture due to fibrosis evidenced by trichrome stain, increase in the alveolar macrophages number and lymphocytic chronic inflammation were observed. Conclusions: In this study, a model of pharmacologically induced pulmonary fibrosis by Bleomycin has been successfully implemented.

Susceptibilidad antimicrobiana y genotipificación de Pseudomonas aeruginosa de pacientes con fibrosis quística y otras patologías en Cartagena (Colombia) / Antimicrobial susceptibility and genotypification of Pseudomonas aeruginosa from cystic fibrosis patients and other diseases in Cartagena (Colombia)

Objetivo: el objetivo de este estudio fue analizar el genotipo y susceptibilidad antimicrobiana de Pseudomonas aeruginosa de pacientes con fibrosis quística y otras patologías. Materiales y métodos: se analizaron 20 aislados de pacientes con fibrosis quística y 20 de pacientes con otras enfermedades por medio de la prueba de susceptibilidad antimicrobiana por microdilución en caldo y técnica del ADN polimorfo amplificado aleatorio. Resultados: se observó que los aislados de pacientes con fibrosis quística presentaron mayor resistencia (56 %) en comparación con aislados de pacientes sin fibrosis quística (25 %). Los antimicrobianos más efectivos en ambos grupos fueron cefepima, ceftriaxona y meropenem. Desde el punto de vista genotípico, se observa heterogeneidad entre las cepas de pacientes con fibrosis quística y dos grupos con cepas idénticas de origen hospitalario, lo que sugiere una posible transmisión cruzada. Conclusión: Concluimos que los porcentajes de resistencia de Pseudomonas aeruginosa en este estudio son altas, y este hallazgo se acentúa en el caso de pacientes con fibrosis quística, lo cual deja muy pocas opciones de tratamiento. La tipificación por técnica del ADN polimórfico amplificado aleatorio permitió conocer la variabilidad de genotipos para tener control sobre la transmisión de cepas, lo cual constituye un tópico de importancia en el sistema de salud y el mejoramiento de la calidad de vida de los pacientes.

Objective: Our aim was to analyze genotype and antimicrobial susceptibility of Pseudo-monas aeruginosa from cystic fibrosis patients and other diseases. Materials and methods: We analyzed 20 isolates from cystic fibrosis patients and 20 from patients with other diseases by dilution antimicrobial susceptibility test and random amplified polymorphic DNA technique. Results: We found that isolates from cystic fibrosis patients had higher resistance (56 %) than isolates from patients without cystic fibrosis (26 %). The most effective antimicrobi-als in both groups were cefepime, ceftriaxone and meropenem. With regard to the geno-type, we observed heterogeneity between strains from cystic fibrosis patients and two clus-ters with identical strains from hospital origin, suggesting a possible cross transmission. Conclusion: We concluded that the resistance rate of Pseudomonas aeruginosa in this study was high and this finding is accentuated in patients with cystic fibrosis, leaving few treatment options. Typification by random amplified polymorphic DNA technique allowed us to know the variability of genotypes to control strain transmission; this is an important topic to optimize health services and the quality of life of our patients.

Anthropometric parameters' cut-off points and predictive value for metabolic syndrome in women from Cartagena, Colombia / Puntos de corte y valor predictivo de medidas antropométricas para el síndrome metabólico en Cartagena, Colombia

Objective. To estimate anthropometric parameters' (APs) cut-off points and association for metabolic syndrome (MetS). Materials and methods. A cross-sectional study was carried out with a total of 434 adult women from Cartagena de Indias, Colombia, in 2012. APs measured were waist circumference (WC), body mass index (BMI), body adiposity index (BAI), waist-hip ratio (WHR) and waist-height ratio (WHtR). Cut-off points were estimated by a receiver operating characteristic curve (ROC). Logistic regression was applied to estimate possible associations. Results. Cut-off points for WC, BMI, BAI, WHR and WHtR were 85 cm, 28 kg/m², 39%, 0.80 and 56, respectively. Only WHtR was associated to MetS (OR=1.11, CI95% [1.07-1.15]). Conclusion. WC cut-off point was higher than those proposed for Latin-American women by the Joint Interim Statement (JIS). WHtR had a low predictive value for MetS.

Objetivo. Estimar los puntos de corte y asociación de las medidas antropométricas para obesidad con el síndrome metabólico (SMet). Material y métodos. Se realizó un estudio de corte transversal con 434 mujeres adultas, en Cartagena de Indias, Colombia, durante 20I2. Se midieron la circunferencia abdominal (CA), el índice de masa corporal (IMC), el índice de adiposidad corporal (IAC) y las razones cintura-cadera (RCC) y cintura-talla (RCT). Los puntos de corte fueron determinados mediante la curva ROC. La fuerza de asociación se estimó por regresión logística. Resultados. Los puntos de corte para CA, IMC, IAC, RCC y RCT fueron, respectivamente, 85 cm, 28 kg/m², 39%, 0.80 y 56. De los parámetros evaluados sólo RCT se asoció con SMet (OR= 1.11, IC95% [1.07-1.15]). Conclusión. El punto de corte para circunferencia abdominal fue superior al reportado en América Latina, según el criterio de declaración provisional conjunta (JIS). La asociación de RCT con SMet fue baja.

Comparación de métodos de extracción de ADN en tejidos parafinados y utilidad para amplificación por PCR / Comparison of DNA extraction methods from formalin-fixed paraffin sections for RCP amplification

Los tejidos fijados en formol e incluidos en parafina son una fuente de material para hallazgos moleculares en el ámbito clínico y científico, demostrándose que el ADN extraído de éstos, es adecuado para amplificación a través de la reacción en cadena de la polimerasa (RCP). En este estudio, se ensayaron tres métodos de extracción de ADN en tejidos incluidos en parafina, con el objetivo de comparar la eficiencia de estos para obtener ADN adecuado, además se analizó su utilidad en amplificación por RCP. Se emplearon tres muestras, correspondientes a una biopsia de pulmón, legrado endometrial y ganglio linfático, todas fijadas en formaldehido al 10% e incluidas en parafina. Utilizándose tres métodos diferentes de extracción de ADN (extracción por salting out, método modificado de Sambrook y kit comercial) El ADN obtenido se cuantificó por espectrofotometría, además se realizó electroforesis en gel de agarosa al 1%, para comprobar si el ADN era de buena calidad y se realizó RCP para el exón 3 del gen caveolina 1. Todos los métodos dieron como resultado una buen producto de ADN genómico, observándose mayor cantidad y pureza en los métodos de salting out y kit comercial, asimismo se obtuvo amplificación del producto esperado por estos dos métodos, no hubo buenos resultados con el ADN extraído por el método modificado "Preparation of Genomic DNA from Mouse Tails y Other Small samples, según Sambrook". El ADN obtenido a partir de tejidos FFIP puede ser amplificado por varios métodos, entre estos, la extracción por salting out es útil y con poca toxicidad, permite obtener ADN de buena calidad para amplificación por RCP.

Formalin-fixed and paraffin-embedded tissues are a source of important molecular findings in clinical and scientific, demonstrating that the DNA extracted from these is suitable for amplification by polymerase chain reaction (PCR). In this study, we tested three methods of DNA extraction, in order to compare the efficiency of these DNA for RCP amplification. Three samples were used, corresponding to a lung biopsy, endometrial curettage and lymph node, all fixed in 10% formaldehyde and embedded in paraffin. Three different methods were used for DNA extraction (extraction by salting out, modified Sambrook method and commercial kit) The DNA obtained was analyzed by spectrophotometry, and gel electrophoresis was performed in 1% agarose to check if the DNA was amplifiable. PCR was performed for exon 3 of caveolin-1 gene. All methods resulted in a good product of genomic DNA, obtaining more quality and purity in the salting out and commercial kit methods. Also, we obtained amplification of the product by these two methods, without favorable results with the DNA extracted by the modified "Preparation of Genomic DNA from Mouse Tails and Other Small samples, according to Sambrook et al." The DNA obtained from FFPE can be amplified by several methods, among them, salting out extraction is an easy, effective and low toxicity for obtaining good quality DNA for PCR amplification.

Coexistencia de Pseudomonas aeruginosa y Candida albicans en infecciones nosocomiales en Cartagena de Indias (Colombia) / Coexistence of Pseudomonas Aeruginosa and Candida albicans in hospital-acquired infections in Cartagena (Colombia)

Las infecciones nosocomiales constituyen un importante problema de salud, cuyos factores de riesgo son hospitalizaciones prolongadas, procedimientos invasivos y tratamientos antimicrobianos de amplio espectro. Pseudomonas aeruginosa y Candida albicans son microorganismos frecuentemente aislados del tracto respiratorio de pacientes gravemente enfermos. Se ha demostrado que estos patógenos pueden tener una interacción de gran significancia en donde las características morfológicas y de virulencia de cada microorganismo se modulan mutuamente aumentando significativamente el riesgo y la severidad de las infecciones urinarias y respiratorias produciendo una alta morbimortalidad. El objetivo de este trabajo fue ilustrar las características microbiológicas y clínicas que son resultado de la presencia conjunta de P. aeruginosa y C. albicans en pacientes gravemente enfermos en hospitales de Cartagena de Indias (Colombia). En todos los casos se destaca un proceso bacteriano inicial, en este caso causado por P. aeruginosa, que fue tratado de acuerdo a la susceptibilidad antimicrobiana encontrada y al disminuir el agente bacteriano responsable se dio lugar al crecimiento de C. albicans y al desarrollo de una nueva infección que empeoró la condición clínica de estos pacientes. Las infecciones conjuntas entre P. aeruginosa y C. albicans siempre se deben sospechar en un paciente hospitalizado, especialmente en unidades de cuidados intensivos y cuando hagan uso de sondas, catéteres y otros materiales para estudios invasivos, pues estos microorganismos son de naturaleza oportunista y claramente pueden empeorar el pronóstico y llevar a complicaciones a pacientes que han sido hospitalizado por causas diferentes o enfermedades de baja complejidad, prolongando el tiempo de hospitalización y aumentando costos.

Body Mass Index and its correlation with pulmonary function in patients with cystic fibrosis from Cartagena (Colombia) / Indice de Masa Corporal y su correlación con la función pulmonar en pacientes con fibrosis quística en Cartagena (Colombia)

Background. Sinus-pulmonary manifestations are a major concern in CF patients. Pulmonary function shows a strong relationship with nutritional status. In Colombia, malnutrition is a public health issue; however there are no reports that fully analyze nutritional status and lung function in CF children. Materials and Methods. A cross-sectional study was developed conducted with 32 patients registered in the CF Attention Program. Measurements were performed following the NIOSH Spirometry Training Guide. Body Mass Index (Z-Score) was calculated according to Onis.et.al. Correlation was determined by a regression model. Results. 14 children were able to perform the test with criteria for the study, mean for age 12.4 ± 3.4 years. % Forced Expiratory Volume1 and % Forced Vital Capacity means were 66.7 ± 28.5 and 69.5 ± 2.0, respectively. Body Mass Index (Z-score) mean was -1.17. BMI-regression for % Forced Expiratory Volume1, r2=0.31(P<0.01); % Forced Vital Capacity, r2=0.22(P<.01). Conclusions. Results demonstrated a correlation between Body Mass Index and Lung Function. This correlation persists, even in populations with notorious nutritional deficit such as this group. Special nutritional therapies should be implemented for this group and similar populations.

Introducción: Las manifestaciones sinopulmonares son de gran interés en pacientes con fibrosis quística. La función pulmonar se ha correlacionado con el estado nutricional en estos pacientes. En Colombia, la malnutrición es un problema de importancia para la salud pública; sin embargo, no se han publicado reportes que analicen el estado nutricional y la función pulmonar en pacientes con fibrosis quística. Materiales y métodos: Se disenó un estudio transversal con 32 pacientes registrados en el Programa de Atención Integral para Pacientes con Fibrosis Quística y sus familias. Los exámenes se realizaron siguiendo la guía de entrenamiento de la NIOSH. El índice de Masa Corporal (Z-Score) fue calculado siguiendo las recomendaciones de Onis et al. El grado de correlación fue determinado por un modelo de regresión. Resultados: 14 ninos fueron incluidos para realizar las pruebas con los criterios del estudio; la edad media fue 12,4±3,4anos; para %Volumen Expiratorio Forzado y %Capacidad Vital Forzada las medias fueron 66,7±28,5 y 69,5±22,0 respectivamente. La media del índice de Masa Corporal (Z-score) fue -1,17. La regresión del índice de Masa Corporal para %Volumen Expiratorio Forzado1 fue r²=0,31(P<0,01), y para %Capacidad Vital Forzada, r²=0,22(P<0,01). Conclusiones: Los resultados demostraron correlación entre el índice de Masa Corporal y la función pulmonar. Esta correlación persistió incluso en poblaciones con un notorio déficit nutricional como la de este estudio. Una terapia nutricional específica debería ser implementada en este grupo y poblaciones similares.

Parámetros hematológicos de pacientes con fibrosis quística de la costa caribe colombiana: análisis y asociación con aislamiento de pseudomonas aeruginosa / Hematological parameters of patients with cystic fibrosis from the Colombian Caribbean coast: analysis and association with isolation of pseudomonas aeruginosa

El hemograma es una herramienta fundamental en el control de pacientes con fibrosis quística porque múltiples factores podrían alterar sus parámetros. El objetivo de éste estudio fue analizar y describir los parámetros hematológicos de pacientes con fibrosis quística y determinar su asociación con la infección causada por Pseudomonas aeruginosa y administración de micronutrientes. A 19 pacientes con historia clínica de fibrosis quística se les realizó un hemograma convencional, cultivo de esputo y examen físico. Siete pacientes (36,8%) presentaron anemia, fue sintomática en un solo caso y leve en los demás. Cuatro pacientes (21%) recibían inadecuada administración de micronutrientes. No hubo asociación significativa entre la presencia de anemia y el régimen de administración de micronutrientes con RR 0,63 IC 95% (0,18–3,81). Cuatro (21%) presentaron leucocitosis, dos (10,5%) presentaron eosinofilía. Se aisló Pseudomonas aeruginosa en 8 pacientes (42%), encontrándose una asociación significativa entre anemia e infección causada por este patógeno, con un RR de 8,25 IC 95% (1,22–12,06), no siendo significativa la relación entre ésta y los valores de leucocitos. La prevalencia de anemia, probablemente de clase ferropénica, fue mayor que la reportada en la literatura y puede relacionarse quizás con la infección por Pseudomonas aeruginosa, mientras que la administración de micronutrientes posiblemente no se relaciona. La administración crónica de medicamentos puede ser uno de los factores importantes que influyan en los parámetros hematológicos.

Adipogénesis in vitro de celulas 3T3-L1 / In vitro adipogenesis of 3T3-l1 Cells

Adipogénesis es el proceso mediante el cual células multipotenciales se diferencian a adipocitos maduros para cumplir un importante papel metabólico y endocrino. El objetivo de este trabajo fue implementar en nuestro laboratorio un modelo de adipogénesis in vitro que nos permitiera posteriormente, estudiar mecanismos de acción farmacológica a nivel molecular. En el trabajo se describe la utilización del modelo de preadipocitos 3T3-L1 y se muestran algunas de las características de crecimiento del cultivo, así como los cambios morfológicos y celulares que acompañan el proceso de diferenciación.